2016版藥典微生物檢驗的學(xué)習(xí)與實施
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如英2
生物學(xué)習(xí)方法
你知道什么是微生物檢測嗎?下面是由學(xué)習(xí)啦小編分享的2016版藥典微生物檢驗的學(xué)習(xí)與實施，希望對你有用。
2016版藥典微生物檢驗的學(xué)習(xí)與實施：
宏觀變化一：全面與國際接軌
以無菌檢查法為例
從上述無菌檢查法的比較中我們不難看出，新藥典參考EP7.0、USP35、JPXV標(biāo)準(zhǔn)，修訂中國藥典的微生物標(biāo)準(zhǔn);參考?xì)W美日藥典標(biāo)準(zhǔn)修訂菌數(shù)標(biāo)準(zhǔn)表達(dá)方式;以需氧菌總數(shù)替代細(xì)菌數(shù)、耐膽鹽的格蘭陰性菌替代大腸菌群等等，并增加新的概念：如含菌量較低的供試品細(xì)菌總數(shù)測定使用最大可能數(shù)法、分散均勻并非一定要溶解等等，同時新藥典引入的偏差調(diào)查概念和內(nèi)容更具體等等方面說明，微生物檢驗技術(shù)與國際標(biāo)準(zhǔn)要求接軌已成定勢。
微觀變化二：實驗環(huán)境的修訂
2015年版藥典中對無菌檢查環(huán)境潔凈度規(guī)定：無菌檢查應(yīng)在B 級背景下的A 級單向流潔凈區(qū)域或D級背景下的隔離器中進(jìn)行。限度檢查要求在受控潔凈環(huán)境下的局部不低于B級單向流空氣區(qū)域進(jìn)行。
環(huán)境的提升，除了設(shè)備硬件的要求提高，還有驗證和維持環(huán)境要求的提高。潔凈或無菌室應(yīng)配備獨立的空氣機(jī)組或空氣凈化系統(tǒng)，以滿足相應(yīng)的檢驗要求，包括溫度和濕度的控制，壓力、照度和噪聲等都應(yīng)符合工作要求?？諝膺^濾系統(tǒng)應(yīng)定期維護(hù)和更換, 并保存相關(guān)記錄。
微生物實驗室應(yīng)劃分成相應(yīng)的潔凈區(qū)域和活菌操作區(qū)域，同時應(yīng)根據(jù)實驗?zāi)康?，在時間或空間上有效分隔不相容的實驗活動，將交叉污染的風(fēng)險降低到最低?；罹僮鲄^(qū)應(yīng)該配備生物安全柜，以避免危害性的生物因子對實驗人員和實驗環(huán)境造成的危害。
實驗室環(huán)境監(jiān)測要求提高，增加人員進(jìn)出表面微生物的監(jiān)測，以降低人員操作時帶來的風(fēng)險。對微生物室使用的消毒劑和清潔劑進(jìn)行驗證，從而有效控制微生物，保證無菌環(huán)境達(dá)到要求。
微生物實驗室需要加強(qiáng)人員在環(huán)境監(jiān)測時的操作規(guī)范，保證環(huán)境監(jiān)測數(shù)據(jù)的準(zhǔn)確性。而且實驗人員應(yīng)經(jīng)過實驗室生物安全方面的培訓(xùn)，保證自身安全，防止微生物在實驗室內(nèi)部污染。
微觀變化三：培養(yǎng)系統(tǒng)的修訂
例如下表：
計數(shù)用培養(yǎng)基的修訂
控制菌所用培養(yǎng)基的修訂
微生物限度方法適用性試驗中的修訂
從上述表格比較不難看出：培養(yǎng)基系統(tǒng)的修訂提升了培養(yǎng)基的靈敏度及微生物的檢出率，對培養(yǎng)基的質(zhì)量控制和人員的檢驗操作要求均提高。實驗室應(yīng)對培養(yǎng)基的適用性、滅菌方法、菌株純度和活性(包括性能)、試劑的質(zhì)量等進(jìn)行監(jiān)控。用于環(huán)境監(jiān)控的培養(yǎng)基須特別防護(hù)，以防止外來的污染物帶到環(huán)境中及避免出現(xiàn)假陽性結(jié)果。試驗菌株的質(zhì)量保證和基本操作技術(shù)均有待提高，包括菌懸液的配制、菌種的鑒定、表型描述、革蘭染色、重要生化試驗等。
微觀變化四：藥典整合后編制的新通則
2015版《中國藥典》通則9201—藥品微生物檢驗替代方法驗證指導(dǎo)原則
2015版《中國藥典》通則9203——藥品微生物實驗室質(zhì)量管理指導(dǎo)原則
2015版《中國藥典》通則9205——藥品潔凈實驗室微生物監(jiān)測和控制指導(dǎo)原則
2015版《中國藥典》通則9206——無菌檢查用隔離系統(tǒng)驗證指導(dǎo)原則
與2016版藥典微生物檢驗的學(xué)習(xí)與實施有關(guān)的閱讀：
控制菌檢查法
控制菌檢查法系用于在規(guī)定的試驗條件下，檢查供試品中是否存在特定的微生物。
當(dāng)本法用于檢查非無菌制劑及其原、輔料等是否符合相應(yīng)的微生物限度標(biāo)準(zhǔn)時，應(yīng)按下列規(guī)定進(jìn)行檢驗，包括樣品取樣量和結(jié)果判斷等。
供試品檢出控制菌或其他致病菌時,按一次檢出結(jié)果為準(zhǔn),不再復(fù)試。
供試液制備及實驗環(huán)境要求同“非無菌產(chǎn)品微生物限度檢查：微生物計數(shù)法”。
如果供試品具有抗菌活性，應(yīng)盡可能去除或中和。供試品檢查時, 若使用了中和劑或滅活劑，應(yīng)確認(rèn)有效性及對微生物無毒性。
供試液制備時如果使用了表面活性劑，應(yīng)確認(rèn)其對微生物無毒性以及與所使用中和劑或滅活劑的相容性。
培養(yǎng)基適用性檢查和控制菌檢查方法適用性試驗
供試品控制菌檢查中所使用的培養(yǎng)基應(yīng)進(jìn)行適用性檢查。
供試品的控制菌檢查方法應(yīng)進(jìn)行方法適用性試驗，以確認(rèn)所采用的方法適合于該產(chǎn)品的控制菌檢查。
若檢驗程序或產(chǎn)品發(fā)生變化可能影響檢驗結(jié)果時，控制菌檢查方法應(yīng)重新進(jìn)行適用性試驗。
菌種及菌液制備
菌種 試驗用菌株的傳代次數(shù)不得超過5 代(從菌種保藏中心獲得的干燥菌種為第0 代)，并采用適宜的菌種保藏技術(shù)進(jìn)行保存，以保證試驗菌株的生物學(xué)特性。
金黃色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)〔CMCC(B)26 003〕
銅綠假單胞菌(Pseudomonas aeruginosa)〔CMCC(B)10 104〕
大腸埃希菌(Escherichia coli)〔CMCC(B)44 102〕
乙型副傷寒沙門菌(Salmonella paratyphi B)〔CMCC(B)50 094〕
白色念珠菌(Candida albicans)〔CMCC(F)98 001〕
生孢梭菌(Clostridium sporogenes)〔CMCC(B)64 941〕
菌液制備 將金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌、大腸埃希菌、沙門菌分別接種于胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基中或在胰酪大豆胨瓊脂培養(yǎng)基上，30～35℃培養(yǎng)18～24 小時;將白色念珠菌接種于沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基上或沙氏葡萄糖液體培養(yǎng)基中，20～25℃培養(yǎng)2～3 天;將生孢梭菌接種于梭菌增菌培養(yǎng)基中置厭氧條件下30～35℃培養(yǎng)24～48 小時或接種于硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基中30～35℃培養(yǎng)18～24 小時。上述培養(yǎng)物用pH7.0 無菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液或0.9%無菌氯化鈉溶液制成適宜濃度的菌懸液。
菌液制備后若在室溫下放置，應(yīng)在2 小時內(nèi)使用;若保存在2～8℃，可在24 小時內(nèi)使用。生孢梭菌孢子懸液可替代新鮮的菌懸液，孢子懸液可保存在2～8℃，在驗證過的貯存期內(nèi)使用。
陰性對照
為確認(rèn)試驗條件是否符合要求，應(yīng)進(jìn)行陰性對照試驗， 陰性對照試驗應(yīng)無菌生長。如陰性對照有菌生長，應(yīng)進(jìn)行偏差調(diào)查。
培養(yǎng)基適用性檢查
控制菌檢查用的成品培養(yǎng)基、由脫水培養(yǎng)基或按處方配制的培養(yǎng)基均應(yīng)進(jìn)行培養(yǎng)基的適用性檢查。
控制菌檢查用培養(yǎng)基的適用性檢查項目包括促生長能力、抑制能力及指示特性的檢查。各培養(yǎng)基的檢查項目及所用的菌株見表1。
表1 控制菌檢查用培養(yǎng)基的促生長能力、抑制能力和指示特性
液體培養(yǎng)基促生長能力檢查 分別接種不大于100cfu 的試驗菌(見表1)于被檢培養(yǎng)基和對照培養(yǎng)基中，在相應(yīng)控制菌檢查規(guī)定的培養(yǎng)溫度及不大于規(guī)定的最短培養(yǎng)時間下培養(yǎng)，與對照培養(yǎng)基管比較，被檢培養(yǎng)基管試驗菌應(yīng)生長良好。
固體培養(yǎng)基促生長能力檢查 用涂布法分別接種不大于100cfu 的試驗菌(見表1)于被檢培養(yǎng)基和對照培養(yǎng)基平板上，在相應(yīng)控制菌檢查規(guī)定的培養(yǎng)溫度及不大于規(guī)定的最短培養(yǎng)時間下培養(yǎng)，被檢培養(yǎng)基與對照培養(yǎng)基上生長的菌落大小、形態(tài)特征應(yīng)一致。
培養(yǎng)基抑制能力檢查 接種不少于100cfu 的試驗菌(見表1)于被檢培養(yǎng)基和對照培養(yǎng)基中，在相應(yīng)控制菌檢查規(guī)定的培養(yǎng)溫度及不小于規(guī)定的最長培養(yǎng)時間下培養(yǎng)，試驗菌應(yīng)不得生長。
培養(yǎng)基指示特性檢查 用涂布法分別接種不大于100cfu 的試驗菌(見表1)于被檢培養(yǎng)基和對照培養(yǎng)基平板上，在相應(yīng)控制菌檢查規(guī)定的培養(yǎng)溫度及不大于規(guī)定的最短培養(yǎng)時間下培養(yǎng)，被檢培養(yǎng)基上試驗菌生長的菌落大小、形態(tài)特征、指示劑反應(yīng)情況等應(yīng)與對照培養(yǎng)基一致。
控制菌檢查方法適用性試驗
供試液制備 按下列“供試品檢查”中的規(guī)定制備供試液。
試驗菌 根據(jù)各品種項下微生物限度標(biāo)準(zhǔn)中規(guī)定檢查的控制菌選擇相應(yīng)試驗菌株，確認(rèn)耐膽鹽革蘭陰性菌檢查方法時,采用大腸埃希菌和銅綠假單胞菌為試驗菌。
適用性試驗 按控制菌檢查法取規(guī)定量供試液及不大于100cfu 的試驗菌接入規(guī)定的培養(yǎng)基中;采用薄膜過濾法時,取規(guī)定量供試液,過濾,沖洗,在最后一次沖洗液中加入試驗菌,過濾后,注入規(guī)定的培養(yǎng)基或取出濾膜接入規(guī)定的培養(yǎng)基中。依相應(yīng)的控制菌檢查方法，在規(guī)定的溫度和最短時間下培養(yǎng)，應(yīng)能檢出所加
試驗菌相應(yīng)的反應(yīng)特征。
結(jié)果判斷 上述試驗若檢出試驗菌，按此供試液制備法和控制菌檢查方法進(jìn)行供試品檢查;若未檢出試驗菌，應(yīng)消除供試品的抑菌活性[見非無菌產(chǎn)品微生物檢查：微生物計數(shù)法中的“抗菌活性的去除或滅活”]，并重新進(jìn)行方法適用性試驗。
如果經(jīng)過試驗確證供試品對試驗菌的抗菌作用無法消除，可認(rèn)為受抑制的微生物不易存在于該供試品中，選擇抑菌成份消除相對徹底的方法進(jìn)行供試品的檢查。
供試品檢查
供試品的控制菌檢查應(yīng)按經(jīng)方法適用性試驗確認(rèn)的方法進(jìn)行。
陽性對照試驗 陽性對照試驗方法同供試品的控制菌檢查,對照菌的加量應(yīng)不大于100cfu。陽性對照試驗應(yīng)檢出相應(yīng)的控制菌。
陰性對照試驗 以稀釋劑代替供試液照相應(yīng)控制菌檢查法檢查，陰性對照試驗應(yīng)無菌生長。如果陰性對照有菌生長，應(yīng)進(jìn)行偏差調(diào)查。
耐膽鹽革蘭陰性菌(Bile-Tolerant Gram-Negative Bacteria)
供試液制備和預(yù)培養(yǎng) 取供試品，用胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基作為稀釋劑照“非無菌產(chǎn)品微生物限度檢查：微生物計數(shù)法”制成1：10 供試液，混勻，在20～25℃培養(yǎng)，培養(yǎng)時間應(yīng)使供試品中的細(xì)菌充分恢復(fù)但不增殖(約2小時)。
定性試驗
除另有規(guī)定外，取相當(dāng)于1g 或1mL 供試品的上述預(yù)培養(yǎng)物接種至適宜體積(經(jīng)方法適用性試驗確定)腸道菌增菌液體培養(yǎng)基中，30～35℃培養(yǎng)24～48 小時后，劃線接種于紫紅膽鹽葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基平板上，30～35℃培養(yǎng)18～24 小時。如果平板上無菌落生長，判供試品未檢出耐膽鹽革蘭陰性菌。
定量試驗
選擇和分離培養(yǎng) 取相當(dāng)于0.1g、0.01g 和0.001g(或0.1mL、0.01mL 和0.001mL)供試品的預(yù)培養(yǎng)物或其稀釋液分別接種至適宜體積(經(jīng)方法適用性試驗確定)腸道菌增菌液體培養(yǎng)基中，30～35℃培養(yǎng)24～48 小時。上述每一培養(yǎng)物分別劃線接種于紫紅膽鹽葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基平板上，30～35℃培養(yǎng)18～24 小時。
結(jié)果判斷 若紫紅膽鹽葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基平板上有菌落生長，則對應(yīng)培養(yǎng)管為陽性，否則為陰性。根據(jù)各培養(yǎng)管檢查結(jié)果，從表2 查1g 或1ml 供試品中含有耐膽鹽革蘭陰性菌的可能菌數(shù)。
表2 耐膽鹽革蘭陰性菌的可能菌數(shù)(N)
注：⑴ +代表紫紅膽鹽葡萄糖瓊脂平板上有菌落生長;-代表紫紅膽鹽葡萄糖瓊脂平板上無菌落生長。
?、?若供試品量減少10 倍(如0.01g 或0.01ml，0.001g 或0.001ml，0.0001g 或0.0001ml)，則每1g(或1mL)供試品中可能的菌數(shù)(N)應(yīng)相應(yīng)增加10 倍。
大腸埃希菌(Escherichia coli)
供試液制備和增菌培養(yǎng) 取供試品，照“非無菌產(chǎn)品微生物限度檢查：微生物計數(shù)法”制成1：10 供試液。取相當(dāng)于1g 或1mL 供試品的供試液，接種至適宜體積(經(jīng)方法適用性試驗確定)的胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基中，混勻，30～35℃培養(yǎng)18～24 小時。
選擇和分離培養(yǎng) 取上述培養(yǎng)物1mL 接種至100mL 麥康凱液體培養(yǎng)基中，42～44℃培養(yǎng)24～48 小時。取麥康凱液體培養(yǎng)物劃線接種于麥康凱瓊脂培養(yǎng)基平板上，30～35℃培養(yǎng)18～72 小時。
結(jié)果判斷 若麥康凱瓊脂培養(yǎng)基平板上有菌落生長，應(yīng)進(jìn)行分離、純化及適宜的鑒定試驗, 確證是否為大腸埃希菌;若麥康凱瓊脂培養(yǎng)基平板上沒有菌落生長，或雖有菌落生長但鑒定結(jié)果為陰性，判供試品未檢出大腸埃希菌。
沙門菌(Salmonella)
供試液制備和增菌培養(yǎng) 取10g 或10mL 供試品直接或處理后接種至適宜體積(經(jīng)方法適用性試驗確定)的胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基中，混勻，30～35℃培養(yǎng)18～24 小時。
選擇和分離培養(yǎng) 取上述培養(yǎng)物0.1mL 接種至10mL RV 沙門增菌液體培養(yǎng)基中，30～35℃培養(yǎng)18～24 小時。取少量RV 沙門菌增菌液體培養(yǎng)物劃線接種于木糖賴氨酸脫氧膽酸鹽瓊脂培養(yǎng)基平板上，30～35℃培養(yǎng)18～48 小時。
沙門菌在木糖賴氨酸脫氧膽酸鹽瓊脂培養(yǎng)基平板上生長良好，菌落為淡紅色或無色、透明或半透明、中心有或無黑色。用接種針挑選疑似菌落于三糖鐵瓊脂培養(yǎng)基高層斜面上進(jìn)行斜面和高層穿刺接種，培養(yǎng)18～24 小時，或采用其它適宜方法進(jìn)一步鑒定。
結(jié)果判斷 若木糖賴氨酸脫氧膽酸鹽瓊脂培養(yǎng)基平板上有疑似菌落生長，且三糖鐵瓊脂培養(yǎng)基的斜面為紅色、底層為黃色，或斜面黃色、底層黃色或黑色，應(yīng)進(jìn)一步進(jìn)行適宜的鑒定試驗, 確證是否為沙門菌。如果平板上沒有菌落生長，或雖有菌落生長但鑒定結(jié)果為陰性，或三糖鐵瓊脂培養(yǎng)基的斜面未見紅色、底層未見黃色;或斜面黃色、底層未見黃色或黑色，判供試品未檢出沙門菌。
銅綠假單胞菌(Pseudomonas aeruginosa)
供試液制備和增菌培養(yǎng) 取供試品，照“非無菌產(chǎn)品微生物限度檢查：微生物計數(shù)法”制成1：10 供試液。取相當(dāng)于1g 或1mL 供試品的供試液，接種至適宜體積(經(jīng)方法適用性試驗確定的)的胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基中，混勻。30～35℃培養(yǎng)18～24 小時。
選擇和分離培養(yǎng) 取上述培養(yǎng)物劃線接種于溴化十六烷基三甲銨瓊脂培養(yǎng)基平板上，30～35℃培養(yǎng)18～72 小時。取上述平板上生長的菌落進(jìn)行氧化酶試驗，或采用其它適宜方法進(jìn)一步鑒定。
氧化酶試驗 將潔凈濾紙片置于平皿內(nèi),用無菌玻棒取上述平板上生長的菌落涂于濾紙片上，滴加新配制的1%二鹽酸N, N -二甲基對苯二胺試液，在30 秒內(nèi)若培養(yǎng)物呈粉紅色并逐漸變?yōu)樽霞t色為氧化酶試驗陽性,否則為陰性。
結(jié)果判斷 若溴化十六烷基三甲銨瓊脂培養(yǎng)基平板上有菌落生長，且氧化酶試驗陽性，應(yīng)進(jìn)一步進(jìn)行適宜的鑒定試驗, 確證是否為銅綠假單胞菌。如果平板上沒有菌落生長，或雖有菌落生長但鑒定結(jié)果為陰性，或氧化酶試驗陰性，判供試品未檢出銅綠假單胞菌。
金黃色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)
供試液制備和增菌培養(yǎng) 取供試品，照“非無菌產(chǎn)品微生物限度檢查：微生物計數(shù)法”制成1：10 供試液。取相當(dāng)于1g 或1mL 供試品的供試液，接種至適宜體積(經(jīng)方法適用性試驗確定)的胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基中，混勻。30～35℃培養(yǎng)18～24 小時。
選擇和分離培養(yǎng) 取上述培養(yǎng)物劃線接種于甘露醇氯化鈉瓊脂培養(yǎng)基平板上，30～35℃培養(yǎng)18～72 小時。
結(jié)果判斷 若甘露醇氯化鈉瓊脂培養(yǎng)基平板上有黃色菌落或外周有黃色環(huán)的白色菌落生長，應(yīng)進(jìn)行分離、純化及適宜的鑒定試驗, 確證是否為金黃色葡萄球菌;若平板上沒有與上述形態(tài)特征相符或疑似的菌落生長，或雖有相符或疑似的菌落生長但鑒定結(jié)果為陰性，判供試品未檢出金黃色葡萄球菌。
梭菌(Clostridia)
供試液制備和熱處理 取供試品，照“非無菌產(chǎn)品微生物限度檢查：微生物計數(shù)法”制成1：10 供試液。取相當(dāng)于1g 或1mL 供試品的供試液2 份，其中1 份置80℃保溫10 分鐘后迅速冷卻。
增菌、選擇和分離培養(yǎng) 將上述2 份供試液分別接種至適宜體積(經(jīng)方法適用性試驗確定)的梭菌增菌培養(yǎng)基中，置厭氧條件下30～35℃培養(yǎng)48 小時。取上述每一培養(yǎng)物少量，分別涂抹接種于哥倫比亞瓊脂培養(yǎng)基平板上，置厭氧條件下30～35℃培養(yǎng)48～72 小時。
過氧化氫酶試驗 取上述平板上生長的菌落，置潔凈玻片上，滴加3%過氧化氫試液，若菌落表面有氣泡產(chǎn)生,為過氧化氫酶試驗陽性,否則為陰性。
結(jié)果判斷 若哥倫比亞瓊脂培養(yǎng)基平板上有厭氧桿菌生長(有或無芽孢)，且過氧化氫酶反應(yīng)陰性的，應(yīng)進(jìn)一步進(jìn)行適宜的鑒定試驗, 確證是否為梭菌;如果哥倫比亞瓊脂培養(yǎng)基平板上沒有厭氧桿菌生長，或雖有相符或疑似的菌落生長但鑒定結(jié)果為陰性，或過氧化氫酶反應(yīng)陽性，判供試品未檢出梭菌。
白色念珠菌(Candida albicans)
供試液制備和增菌培養(yǎng) 取供試品，照“非無菌產(chǎn)品微生物限度檢查：微生物計數(shù)法”制成1：10 供試液。取相當(dāng)于1g 或1mL 供試品的供試液，接種至適宜體積(經(jīng)方法適用性試驗確定)的沙氏葡萄糖液體培養(yǎng)基中，混勻，30～35℃培養(yǎng)3～5 天。
選擇和分離 取上述預(yù)培養(yǎng)物劃線接種于沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基平板上，30～35℃培養(yǎng)24～48 小時。
白色念珠菌在沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基上生長的菌落呈乳白色，偶見淡黃色,表面光滑有濃酵母氣味,培養(yǎng)時間稍久則菌落增大，顏色變深、質(zhì)地變硬或有皺褶。挑取疑似菌落接種至念珠菌顯色培養(yǎng)基平板上，培養(yǎng)24～48 小時(必要時延長至72 小時)，或采用其它適宜方法進(jìn)一步鑒定。
結(jié)果判斷 若沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基平板上有疑似菌落生長，且疑似菌在念珠菌顯色培養(yǎng)基平板上生長的菌落呈陽性反應(yīng)，應(yīng)進(jìn)一步進(jìn)行適宜的鑒定試驗,確證是否為白色念珠菌;若沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基平板上沒有菌落生長，或雖有菌落生長但鑒定結(jié)果為陰性，或疑似菌在念珠菌顯色培養(yǎng)基平板上生長的菌落呈陰性反應(yīng)，判供試品未檢出白色念珠菌。
稀釋液
稀釋液配制后,應(yīng)采用驗證合格的滅菌程序滅菌。
1. pH7.0 無菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液 取磷酸二氫鉀3.56g，無水磷酸氫二鈉5.77g，氯化鈉4.30g，蛋白胨1.00g，加水1000ml，微溫溶解，濾清，分裝，滅菌。
2. pH6.8 無菌磷酸鹽緩沖液、pH7.2 無菌磷酸鹽緩沖液 、pH7.6 無菌磷酸鹽緩沖液按緩沖液 照緩沖液配制后,過濾,分裝,滅菌。
如需要,可在上述稀釋液滅菌前或滅菌后加入表面活性劑或中和劑等。
3.0.9%無菌氯化鈉溶液 取氯化鈉9.0g,加水溶解使成1000ml，過濾，分裝，滅菌。
培養(yǎng)基及其制備方法
培養(yǎng)基可按以下處方制備,也可使用按該處方生產(chǎn)的符合要求的脫水培養(yǎng)基。配制后,應(yīng)按驗證過的高壓滅菌程序滅菌。
1.胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基(TSB)
胰酪胨 17.0g 氯化鈉 5.0g
大豆木瓜蛋白酶水解物 3.0g 磷酸氫二鉀 2.5g
葡萄糖/無水葡萄糖2.5g/2.3g 水 1000ml
除葡萄糖外，取上述成分，混合，微溫溶解，濾過，調(diào)節(jié)pH 使滅菌后在25℃的pH 值為7.3±0.2，加入葡萄糖，分裝，滅菌。
2. 胰酪大豆胨瓊脂培養(yǎng)基(TSA)
胰酪胨 15.0g 瓊脂 15.0g
大豆木瓜蛋白酶水解物 5.0g 水 1000ml
氯化鈉 5.0g
除瓊脂外，取上述成分，混合，微溫溶解，調(diào)節(jié)pH 使滅菌后在25℃的pH 值為7.3±0.2，加入瓊脂，加熱熔化后，搖勻，分裝，滅菌。
3. 沙氏葡萄糖液體培養(yǎng)基(SDB)
動物組織胃蛋白酶水解物和胰酪胨等量混合物 10.0g
葡萄糖 20.0g 水 1000ml
除葡萄糖外，取上述成分，混合，微溫溶解，調(diào)節(jié)pH 使滅菌后在25℃的pH 值為5.6±0.2，加入葡萄糖，搖勻，分裝，滅菌。
4.沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基(SDA)
動物組織胃蛋白酶水解物和胰酪胨等量混合物 10.0g
葡萄糖 40.0g 水 1000ml
瓊脂 15.0g
除葡萄糖、瓊脂外，取上述成分，混合，微溫溶解，調(diào)節(jié)pH 使滅菌后在25℃的pH 值為5.6±0.2，加入瓊脂，加熱熔化后，再加入葡萄糖，搖勻，分裝，滅菌。
如使用含抗生素的沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基，應(yīng)確認(rèn)培養(yǎng)基中所加的抗生素量不影響供試品中霉菌和酵母菌的生長。
5.馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基(PDA)
馬鈴薯(去皮) 200g 瓊脂 14.0g
葡萄糖 20.0g 水 1000ml
取馬鈴薯，切成小塊，加水1000mL，煮沸20-30min，用6-8 層紗布過濾，取濾液補(bǔ)水至1000ml，調(diào)節(jié)pH 使滅菌后在25℃的pH 值為5.6±0.2，加入瓊脂,加熱溶化后, 再加入葡萄糖，搖勻，分裝，滅菌。
6.玫瑰紅鈉瓊脂培養(yǎng)基
胨 5.0g 玫瑰紅鈉 0.0133g
葡萄糖 10.0g 瓊脂 14.0g
磷酸二氫鉀 1.0g 水 1000ml
硫酸鎂 0.5g
除葡萄糖、玫瑰紅鈉外,取上述成分,混合,微溫溶解，加入葡萄糖、玫瑰紅鈉,搖勻，分裝，滅菌。
7.硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基
胰酪胨 15.0g 氯化鈉 2.5g
酵母浸出粉 5.0g 瓊脂 0.75g
無水葡萄糖 5.0g 水 1000 ml
L-胱氨酸 0.5g
新配制的0.1%刃天青溶液 1.0 ml
硫乙醇酸鈉(或硫乙醇酸) 0.5g(0.3 ml)
除葡萄糖和刃天青溶液外,取上述成分,混合,微溫溶解，調(diào)節(jié)pH為弱堿性，煮沸，濾清，加入葡萄糖和刃天青溶液,搖勻，調(diào)節(jié)pH，使滅菌后在25℃的pH 值為7.1±0.2。分裝至適宜的容器中，其裝量與容器高度的比例應(yīng)符合培養(yǎng)結(jié)束后培養(yǎng)基氧化層(粉紅色)不超過培養(yǎng)基深度的1/2。滅菌。在供試品接種前，培養(yǎng)基氧化層的高度不得超過培養(yǎng)基深度的1/5，否則，須經(jīng)100℃水浴加熱至粉紅色消失(不超過20分鐘)，迅速冷卻，只限加熱一次，并防止被污染。
8.腸道菌增菌液體培養(yǎng)基
明膠胰酶水解物 10.0g 二水合磷酸氫二鈉 8.0g
牛膽鹽 20.0g 亮綠 15mg
葡萄糖 5.0g 水 1000ml
磷酸二氫鉀 2.0g
除葡萄糖、亮綠外,取上述成分,混合,微溫溶解，調(diào)節(jié)pH 使加熱后在25℃的pH 值為7.2±0.2，加入葡萄糖、亮綠，加熱至100℃ 30 分鐘，立即冷卻。
9.紫紅膽鹽葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基
酵母浸出粉 3.0g 中性紅 30mg
明膠胰酶水解物 7.0g 結(jié)晶紫 2mg
脫氧膽酸鈉 1.5g 瓊脂 15.0g
葡萄糖 10.0g 水 1000ml
氯化鈉 5.0g
除葡萄糖、中性紅、結(jié)晶紫、瓊脂外,取上述成分,混合,微溫溶解，調(diào)節(jié)pH使加熱后在25℃的pH 值為7.4±0.2。加入葡萄糖、中性紅、結(jié)晶紫、瓊脂，加熱煮沸(不能在高壓滅菌器中加熱)。
10.麥康凱液體培養(yǎng)基
明膠胰酶水解物 20.0g 溴甲酚紫 10mg
乳糖 10.0g 水 1000ml
牛膽鹽 5.0g
除乳糖、溴甲酚紫外，取上述成分，混合，微溫溶解，調(diào)節(jié)pH 使滅菌后在25℃的pH 值為7.3±0.2，加入乳糖、溴甲酚紫，分裝，滅菌。
11.麥康凱瓊脂培養(yǎng)基
明膠胰酶水解物 17.0g 中性紅 30.0mg
胨 3.0g 結(jié)晶紫 1mg
乳糖 10.0g 瓊脂 13.5g
脫氧膽酸鈉 1.5g 水 1000ml
氯化鈉 5.0g
除乳糖、中性紅、結(jié)晶紫、瓊脂外，取上述成分，混合，微溫溶解，調(diào)節(jié)pH使滅菌后在25℃的pH 值為7.1±0.2，加入乳糖、中性紅、結(jié)晶紫、瓊脂，加熱煮沸1 分鐘，并不斷振搖，分裝，滅菌。
12.RV 沙門菌增菌液體培養(yǎng)基
大豆胨 4.5g 六水合氯化鎂 29.0g
氯化鈉 8.0g 孔雀綠 36mg
磷酸氫二鉀 0.4g 水 1000ml
磷酸二氫鉀 0.6g
除孔雀綠外，取上述成分，混合，微溫溶解，調(diào)節(jié)pH 使滅菌后在25℃的pH值為5.2±0.2。加入孔雀綠，分裝，滅菌,滅菌溫度不能超過115℃。
13.木糖賴氨酸脫氧膽酸鹽瓊脂培養(yǎng)基
酵母浸出粉 3.0g 氯化鈉 5.0g
L-賴氨酸 5.0g 硫代硫酸鈉 6.8g
木糖 3.5g 枸櫞酸鐵銨 0.8g
乳糖 7.5g 酚紅 80mg
蔗糖 7.5g 瓊脂 13.5g
脫氧膽酸鈉 2.5g 水 1000ml
除三種糖、酚紅、瓊脂外，取上述成分，混合，微溫溶解,調(diào)節(jié)pH 使加熱后在25℃的pH 值為7.4±0.2，加入三種糖、酚紅、瓊脂，加熱至沸騰，冷至50℃傾注平皿(不能在高壓滅菌器中加熱)。
14.三糖鐵瓊脂培養(yǎng)基(TSI)
胨 20.0g 硫酸亞鐵 0.2g
牛肉浸出粉 5.0g 硫代硫酸鈉 0.2g
乳糖 10.0g 0.2%酚磺酞指示液 12.5ml
蔗糖 10.0g 瓊脂 12.0g
葡萄糖 1.0g 水 1000ml
氯化鈉 5.0g
除三種糖、0.2%酚磺酞指示液、瓊脂外，取上述成分，混合，微溫溶解, 調(diào)節(jié)pH 使滅菌后在25℃的pH 值為7.3±0.1，加入瓊脂，加熱溶化后，再加入其余各成分，搖勻，分裝，滅菌，制成高底層(2～3cm)短斜面。
15.溴化十六烷基三甲銨瓊脂培養(yǎng)基
明膠胰酶水解物 20.0g 甘油 10ml
氯化鎂 1.4g 溴化十六烷基三甲銨 0.3g
硫酸鉀 10.0g 瓊脂 13.6g
水 1000ml
除瓊脂外，取上述成分，混合，微溫溶解，調(diào)節(jié)pH 使滅菌后在25℃的pH 值為7.4±0.2，加入瓊脂，加熱煮沸1 分鐘，分裝，滅菌。
16.甘露醇氯化鈉瓊脂培養(yǎng)基
胰酪胨 5.0g 氯化鈉 75.0g
動物組織胃蛋白酶水解物 5.0g 酚紅 25mg
牛肉浸出粉 1.0g 瓊脂 15.0g
D-甘露醇 10.0g 水 1000ml
除甘露醇、酚紅、瓊脂外，取上述成分，混合，微溫溶解，調(diào)節(jié)pH 使滅菌后在25℃的pH 值為7.4±0.2，加熱并振搖，加入甘露醇、酚紅、瓊脂，煮沸1分鐘，分裝，滅菌。
17.梭菌增菌培養(yǎng)基
胨 10.0g 鹽酸半胱氨酸 0.5g
牛肉浸出粉 10.0g 乙酸鈉 3.0g
酵母浸出粉 3.0g 氯化鈉 5.0g
可溶性淀粉 1.0g 瓊脂 0.5g
葡萄糖 5.0g 水 1000ml
除葡萄糖外，取上述成分，混合，加熱煮沸使溶解，并不斷攪拌。如需要，調(diào)節(jié)pH 使滅菌后在25℃的pH 值為6.8±0.2。加入葡萄糖，混勻，分裝，滅菌。
18.哥倫比亞瓊脂培養(yǎng)基
胰酪胨 10.0g 玉米淀粉 1.0g
肉胃蛋白酶水解物 5.0g 氯化鈉 5.0g
心胰酶水解物 3.0g 瓊脂 10.0～15.0g(依凝固力)
酵母浸出粉 5.0g 水 1000ml
除瓊脂外，取上述成分，混合，加熱煮沸使溶解，并不斷攪拌。如需要，調(diào)節(jié)pH 使滅菌后在25℃的pH 值為7.3±0.2，加入瓊脂，加熱溶化，分裝，滅菌。如有必要，滅菌后，冷至45～50℃加入相當(dāng)于20mg 慶大霉素的無菌硫酸慶大霉素，混勻，傾注平皿。
19.珠菌顯色培養(yǎng)基
胨 10.2g 瓊脂 15g
氫罌素 0.5g 水 1000ml
色素 22.0g
除瓊脂外,取上述成分,混合,微溫溶解,調(diào)節(jié)pH 值使加熱后在25℃的pH 為6.3±0.2。濾過，加入瓊脂，加熱煮沸，不斷攪拌至瓊脂完全溶解，傾注平皿。
以上是由小編分享的2016版藥典微生物檢驗的學(xué)習(xí)與實施全部內(nèi)容，希望對你的考試有幫助。
2016版藥典微生物檢驗的學(xué)習(xí)與實施：
宏觀變化一：全面與國際接軌
以無菌檢查法為例
從上述無菌檢查法的比較中我們不難看出，新藥典參考EP7.0、USP35、JPXV標(biāo)準(zhǔn)，修訂中國藥典的微生物標(biāo)準(zhǔn);參考?xì)W美日藥典標(biāo)準(zhǔn)修訂菌數(shù)標(biāo)準(zhǔn)表達(dá)方式;以需氧菌總數(shù)替代細(xì)菌數(shù)、耐膽鹽的格蘭陰性菌替代大腸菌群等等，并增加新的概念：如含菌量較低的供試品細(xì)菌總數(shù)測定使用最大可能數(shù)法、分散均勻并非一定要溶解等等，同時新藥典引入的偏差調(diào)查概念和內(nèi)容更具體等等方面說明，微生物檢驗技術(shù)與國際標(biāo)準(zhǔn)要求接軌已成定勢。
微觀變化二：實驗環(huán)境的修訂
2015年版藥典中對無菌檢查環(huán)境潔凈度規(guī)定：無菌檢查應(yīng)在B 級背景下的A 級單向流潔凈區(qū)域或D級背景下的隔離器中進(jìn)行。限度檢查要求在受控潔凈環(huán)境下的局部不低于B級單向流空氣區(qū)域進(jìn)行。
環(huán)境的提升，除了設(shè)備硬件的要求提高，還有驗證和維持環(huán)境要求的提高。潔凈或無菌室應(yīng)配備獨立的空氣機(jī)組或空氣凈化系統(tǒng)，以滿足相應(yīng)的檢驗要求，包括溫度和濕度的控制，壓力、照度和噪聲等都應(yīng)符合工作要求?？諝膺^濾系統(tǒng)應(yīng)定期維護(hù)和更換, 并保存相關(guān)記錄。
微生物實驗室應(yīng)劃分成相應(yīng)的潔凈區(qū)域和活菌操作區(qū)域，同時應(yīng)根據(jù)實驗?zāi)康?，在時間或空間上有效分隔不相容的實驗活動，將交叉污染的風(fēng)險降低到最低?；罹僮鲄^(qū)應(yīng)該配備生物安全柜，以避免危害性的生物因子對實驗人員和實驗環(huán)境造成的危害。
實驗室環(huán)境監(jiān)測要求提高，增加人員進(jìn)出表面微生物的監(jiān)測，以降低人員操作時帶來的風(fēng)險。對微生物室使用的消毒劑和清潔劑進(jìn)行驗證，從而有效控制微生物，保證無菌環(huán)境達(dá)到要求。
微生物實驗室需要加強(qiáng)人員在環(huán)境監(jiān)測時的操作規(guī)范，保證環(huán)境監(jiān)測數(shù)據(jù)的準(zhǔn)確性。而且實驗人員應(yīng)經(jīng)過實驗室生物安全方面的培訓(xùn)，保證自身安全，防止微生物在實驗室內(nèi)部污染。
微觀變化三：培養(yǎng)系統(tǒng)的修訂
例如下表：
計數(shù)用培養(yǎng)基的修訂
控制菌所用培養(yǎng)基的修訂
微生物限度方法適用性試驗中的修訂
從上述表格比較不難看出：培養(yǎng)基系統(tǒng)的修訂提升了培養(yǎng)基的靈敏度及微生物的檢出率，對培養(yǎng)基的質(zhì)量控制和人員的檢驗操作要求均提高。實驗室應(yīng)對培養(yǎng)基的適用性、滅菌方法、菌株純度和活性(包括性能)、試劑的質(zhì)量等進(jìn)行監(jiān)控。用于環(huán)境監(jiān)控的培養(yǎng)基須特別防護(hù)，以防止外來的污染物帶到環(huán)境中及避免出現(xiàn)假陽性結(jié)果。試驗菌株的質(zhì)量保證和基本操作技術(shù)均有待提高，包括菌懸液的配制、菌種的鑒定、表型描述、革蘭染色、重要生化試驗等。
微觀變化四：藥典整合后編制的新通則
2015版《中國藥典》通則9201—藥品微生物檢驗替代方法驗證指導(dǎo)原則
2015版《中國藥典》通則9203——藥品微生物實驗室質(zhì)量管理指導(dǎo)原則
2015版《中國藥典》通則9205——藥品潔凈實驗室微生物監(jiān)測和控制指導(dǎo)原則
2015版《中國藥典》通則9206——無菌檢查用隔離系統(tǒng)驗證指導(dǎo)原則
與2016版藥典微生物檢驗的學(xué)習(xí)與實施有關(guān)的閱讀：
控制菌檢查法
控制菌檢查法系用于在規(guī)定的試驗條件下，檢查供試品中是否存在特定的微生物。
當(dāng)本法用于檢查非無菌制劑及其原、輔料等是否符合相應(yīng)的微生物限度標(biāo)準(zhǔn)時，應(yīng)按下列規(guī)定進(jìn)行檢驗，包括樣品取樣量和結(jié)果判斷等。
供試品檢出控制菌或其他致病菌時,按一次檢出結(jié)果為準(zhǔn),不再復(fù)試。
供試液制備及實驗環(huán)境要求同“非無菌產(chǎn)品微生物限度檢查：微生物計數(shù)法”。
如果供試品具有抗菌活性，應(yīng)盡可能去除或中和。供試品檢查時, 若使用了中和劑或滅活劑，應(yīng)確認(rèn)有效性及對微生物無毒性。
供試液制備時如果使用了表面活性劑，應(yīng)確認(rèn)其對微生物無毒性以及與所使用中和劑或滅活劑的相容性。
培養(yǎng)基適用性檢查和控制菌檢查方法適用性試驗
供試品控制菌檢查中所使用的培養(yǎng)基應(yīng)進(jìn)行適用性檢查。
供試品的控制菌檢查方法應(yīng)進(jìn)行方法適用性試驗，以確認(rèn)所采用的方法適合于該產(chǎn)品的控制菌檢查。
若檢驗程序或產(chǎn)品發(fā)生變化可能影響檢驗結(jié)果時，控制菌檢查方法應(yīng)重新進(jìn)行適用性試驗。
菌種及菌液制備
菌種 試驗用菌株的傳代次數(shù)不得超過5 代(從菌種保藏中心獲得的干燥菌種為第0 代)，并采用適宜的菌種保藏技術(shù)進(jìn)行保存，以保證試驗菌株的生物學(xué)特性。
金黃色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)〔CMCC(B)26 003〕
銅綠假單胞菌(Pseudomonas aeruginosa)〔CMCC(B)10 104〕
大腸埃希菌(Escherichia coli)〔CMCC(B)44 102〕
乙型副傷寒沙門菌(Salmonella paratyphi B)〔CMCC(B)50 094〕
白色念珠菌(Candida albicans)〔CMCC(F)98 001〕
生孢梭菌(Clostridium sporogenes)〔CMCC(B)64 941〕
菌液制備 將金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌、大腸埃希菌、沙門菌分別接種于胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基中或在胰酪大豆胨瓊脂培養(yǎng)基上，30～35℃培養(yǎng)18～24 小時;將白色念珠菌接種于沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基上或沙氏葡萄糖液體培養(yǎng)基中，20～25℃培養(yǎng)2～3 天;將生孢梭菌接種于梭菌增菌培養(yǎng)基中置厭氧條件下30～35℃培養(yǎng)24～48 小時或接種于硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基中30～35℃培養(yǎng)18～24 小時。上述培養(yǎng)物用pH7.0 無菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液或0.9%無菌氯化鈉溶液制成適宜濃度的菌懸液。
菌液制備后若在室溫下放置，應(yīng)在2 小時內(nèi)使用;若保存在2～8℃，可在24 小時內(nèi)使用。生孢梭菌孢子懸液可替代新鮮的菌懸液，孢子懸液可保存在2～8℃，在驗證過的貯存期內(nèi)使用。
陰性對照
為確認(rèn)試驗條件是否符合要求，應(yīng)進(jìn)行陰性對照試驗， 陰性對照試驗應(yīng)無菌生長。如陰性對照有菌生長，應(yīng)進(jìn)行偏差調(diào)查。
培養(yǎng)基適用性檢查
控制菌檢查用的成品培養(yǎng)基、由脫水培養(yǎng)基或按處方配制的培養(yǎng)基均應(yīng)進(jìn)行培養(yǎng)基的適用性檢查。
控制菌檢查用培養(yǎng)基的適用性檢查項目包括促生長能力、抑制能力及指示特性的檢查。各培養(yǎng)基的檢查項目及所用的菌株見表1。
表1 控制菌檢查用培養(yǎng)基的促生長能力、抑制能力和指示特性
| 控制菌檢查 | 培養(yǎng)基 | 特性 | 試驗菌株 |
| 耐膽鹽革蘭陰性菌 | 腸道菌增菌液體培養(yǎng)基 | 促生長能力 | 大腸埃希菌、銅綠假單胞菌 |
| 抑制能力 | 金黃色葡萄球菌 | ||
| 紫紅膽鹽葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基 | 促生長能力+指示特性 | 大腸埃希菌、銅綠假單胞菌 | |
| 大腸埃希菌 | 麥康凱液體培養(yǎng)基 | 促生長能力 | 大腸埃希菌 |
| 抑制能力 | 金黃色葡萄球菌 | ||
| 麥康凱瓊脂培養(yǎng)基 | 促生長能力+指示特性 | 大腸埃希菌 | |
| 沙門菌 | RV 沙門菌增菌液體培養(yǎng)基 | 促生長能力 | 乙型副傷寒沙門菌 |
| 抑制能力 | 金黃色葡萄球菌 | ||
| 木糖賴氨酸脫氧膽酸鹽瓊脂培養(yǎng)基 | 促生長能力+指示特性 | 乙型副傷寒沙門菌 | |
| 三糖鐵瓊脂培養(yǎng)基 | 指示能力 | 乙型副傷寒沙門菌 | |
| 銅綠假單胞菌 | 溴化十六烷基三甲銨瓊脂培養(yǎng)基 | 促生長能力 | 銅綠假單胞菌 |
| 抑制能力 | 大腸埃希菌 | ||
| 金黃色葡萄球菌 | 甘露醇氯化鈉瓊脂培養(yǎng)基 | 促生長能力+指示特性 | 金黃色葡萄球菌 |
| 抑制能力 | 大腸埃希菌 | ||
| 梭菌 | 梭菌增菌培養(yǎng)基 | 促生長能力 | 生孢梭菌 |
| 哥倫比亞瓊脂培養(yǎng)基 | 促生長能力 | 生孢梭菌 | |
| 白色念珠菌 | 沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基 | 促生長能力 | 白色念珠菌 |
| 沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基 | 促生長能力+指示特性 | 白色念珠菌 | |
| 念珠菌顯色培養(yǎng)基 | 促生長能力+指示能力 | 白色念珠菌 | |
| 抑制能力 | 大腸埃希菌 |
固體培養(yǎng)基促生長能力檢查 用涂布法分別接種不大于100cfu 的試驗菌(見表1)于被檢培養(yǎng)基和對照培養(yǎng)基平板上，在相應(yīng)控制菌檢查規(guī)定的培養(yǎng)溫度及不大于規(guī)定的最短培養(yǎng)時間下培養(yǎng)，被檢培養(yǎng)基與對照培養(yǎng)基上生長的菌落大小、形態(tài)特征應(yīng)一致。
培養(yǎng)基抑制能力檢查 接種不少于100cfu 的試驗菌(見表1)于被檢培養(yǎng)基和對照培養(yǎng)基中，在相應(yīng)控制菌檢查規(guī)定的培養(yǎng)溫度及不小于規(guī)定的最長培養(yǎng)時間下培養(yǎng)，試驗菌應(yīng)不得生長。
培養(yǎng)基指示特性檢查 用涂布法分別接種不大于100cfu 的試驗菌(見表1)于被檢培養(yǎng)基和對照培養(yǎng)基平板上，在相應(yīng)控制菌檢查規(guī)定的培養(yǎng)溫度及不大于規(guī)定的最短培養(yǎng)時間下培養(yǎng)，被檢培養(yǎng)基上試驗菌生長的菌落大小、形態(tài)特征、指示劑反應(yīng)情況等應(yīng)與對照培養(yǎng)基一致。
控制菌檢查方法適用性試驗
供試液制備 按下列“供試品檢查”中的規(guī)定制備供試液。
試驗菌 根據(jù)各品種項下微生物限度標(biāo)準(zhǔn)中規(guī)定檢查的控制菌選擇相應(yīng)試驗菌株，確認(rèn)耐膽鹽革蘭陰性菌檢查方法時,采用大腸埃希菌和銅綠假單胞菌為試驗菌。
適用性試驗 按控制菌檢查法取規(guī)定量供試液及不大于100cfu 的試驗菌接入規(guī)定的培養(yǎng)基中;采用薄膜過濾法時,取規(guī)定量供試液,過濾,沖洗,在最后一次沖洗液中加入試驗菌,過濾后,注入規(guī)定的培養(yǎng)基或取出濾膜接入規(guī)定的培養(yǎng)基中。依相應(yīng)的控制菌檢查方法，在規(guī)定的溫度和最短時間下培養(yǎng)，應(yīng)能檢出所加
試驗菌相應(yīng)的反應(yīng)特征。
結(jié)果判斷 上述試驗若檢出試驗菌，按此供試液制備法和控制菌檢查方法進(jìn)行供試品檢查;若未檢出試驗菌，應(yīng)消除供試品的抑菌活性[見非無菌產(chǎn)品微生物檢查：微生物計數(shù)法中的“抗菌活性的去除或滅活”]，并重新進(jìn)行方法適用性試驗。
如果經(jīng)過試驗確證供試品對試驗菌的抗菌作用無法消除，可認(rèn)為受抑制的微生物不易存在于該供試品中，選擇抑菌成份消除相對徹底的方法進(jìn)行供試品的檢查。
供試品檢查
供試品的控制菌檢查應(yīng)按經(jīng)方法適用性試驗確認(rèn)的方法進(jìn)行。
陽性對照試驗 陽性對照試驗方法同供試品的控制菌檢查,對照菌的加量應(yīng)不大于100cfu。陽性對照試驗應(yīng)檢出相應(yīng)的控制菌。
陰性對照試驗 以稀釋劑代替供試液照相應(yīng)控制菌檢查法檢查，陰性對照試驗應(yīng)無菌生長。如果陰性對照有菌生長，應(yīng)進(jìn)行偏差調(diào)查。
耐膽鹽革蘭陰性菌(Bile-Tolerant Gram-Negative Bacteria)
供試液制備和預(yù)培養(yǎng) 取供試品，用胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基作為稀釋劑照“非無菌產(chǎn)品微生物限度檢查：微生物計數(shù)法”制成1：10 供試液，混勻，在20～25℃培養(yǎng)，培養(yǎng)時間應(yīng)使供試品中的細(xì)菌充分恢復(fù)但不增殖(約2小時)。
定性試驗
除另有規(guī)定外，取相當(dāng)于1g 或1mL 供試品的上述預(yù)培養(yǎng)物接種至適宜體積(經(jīng)方法適用性試驗確定)腸道菌增菌液體培養(yǎng)基中，30～35℃培養(yǎng)24～48 小時后，劃線接種于紫紅膽鹽葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基平板上，30～35℃培養(yǎng)18～24 小時。如果平板上無菌落生長，判供試品未檢出耐膽鹽革蘭陰性菌。
定量試驗
選擇和分離培養(yǎng) 取相當(dāng)于0.1g、0.01g 和0.001g(或0.1mL、0.01mL 和0.001mL)供試品的預(yù)培養(yǎng)物或其稀釋液分別接種至適宜體積(經(jīng)方法適用性試驗確定)腸道菌增菌液體培養(yǎng)基中，30～35℃培養(yǎng)24～48 小時。上述每一培養(yǎng)物分別劃線接種于紫紅膽鹽葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基平板上，30～35℃培養(yǎng)18～24 小時。
結(jié)果判斷 若紫紅膽鹽葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基平板上有菌落生長，則對應(yīng)培養(yǎng)管為陽性，否則為陰性。根據(jù)各培養(yǎng)管檢查結(jié)果，從表2 查1g 或1ml 供試品中含有耐膽鹽革蘭陰性菌的可能菌數(shù)。
表2 耐膽鹽革蘭陰性菌的可能菌數(shù)(N)
| 各供試品量的檢查結(jié)果 | 每1g(或1mL)供試品中可能的菌數(shù)cfu | ||
| 0.1g 或0.1ml | 0.01g 或0.01ml | 0.001g 或0.001ml | |
| + | + | + | N＞103 |
| + | + | - | 102＜N＜103 |
| + | - | - | 10＜N＜102 |
| - | - | - | N＜10 |
?、?若供試品量減少10 倍(如0.01g 或0.01ml，0.001g 或0.001ml，0.0001g 或0.0001ml)，則每1g(或1mL)供試品中可能的菌數(shù)(N)應(yīng)相應(yīng)增加10 倍。
大腸埃希菌(Escherichia coli)
供試液制備和增菌培養(yǎng) 取供試品，照“非無菌產(chǎn)品微生物限度檢查：微生物計數(shù)法”制成1：10 供試液。取相當(dāng)于1g 或1mL 供試品的供試液，接種至適宜體積(經(jīng)方法適用性試驗確定)的胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基中，混勻，30～35℃培養(yǎng)18～24 小時。
選擇和分離培養(yǎng) 取上述培養(yǎng)物1mL 接種至100mL 麥康凱液體培養(yǎng)基中，42～44℃培養(yǎng)24～48 小時。取麥康凱液體培養(yǎng)物劃線接種于麥康凱瓊脂培養(yǎng)基平板上，30～35℃培養(yǎng)18～72 小時。
結(jié)果判斷 若麥康凱瓊脂培養(yǎng)基平板上有菌落生長，應(yīng)進(jìn)行分離、純化及適宜的鑒定試驗, 確證是否為大腸埃希菌;若麥康凱瓊脂培養(yǎng)基平板上沒有菌落生長，或雖有菌落生長但鑒定結(jié)果為陰性，判供試品未檢出大腸埃希菌。
沙門菌(Salmonella)
供試液制備和增菌培養(yǎng) 取10g 或10mL 供試品直接或處理后接種至適宜體積(經(jīng)方法適用性試驗確定)的胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基中，混勻，30～35℃培養(yǎng)18～24 小時。
選擇和分離培養(yǎng) 取上述培養(yǎng)物0.1mL 接種至10mL RV 沙門增菌液體培養(yǎng)基中，30～35℃培養(yǎng)18～24 小時。取少量RV 沙門菌增菌液體培養(yǎng)物劃線接種于木糖賴氨酸脫氧膽酸鹽瓊脂培養(yǎng)基平板上，30～35℃培養(yǎng)18～48 小時。
沙門菌在木糖賴氨酸脫氧膽酸鹽瓊脂培養(yǎng)基平板上生長良好，菌落為淡紅色或無色、透明或半透明、中心有或無黑色。用接種針挑選疑似菌落于三糖鐵瓊脂培養(yǎng)基高層斜面上進(jìn)行斜面和高層穿刺接種，培養(yǎng)18～24 小時，或采用其它適宜方法進(jìn)一步鑒定。
結(jié)果判斷 若木糖賴氨酸脫氧膽酸鹽瓊脂培養(yǎng)基平板上有疑似菌落生長，且三糖鐵瓊脂培養(yǎng)基的斜面為紅色、底層為黃色，或斜面黃色、底層黃色或黑色，應(yīng)進(jìn)一步進(jìn)行適宜的鑒定試驗, 確證是否為沙門菌。如果平板上沒有菌落生長，或雖有菌落生長但鑒定結(jié)果為陰性，或三糖鐵瓊脂培養(yǎng)基的斜面未見紅色、底層未見黃色;或斜面黃色、底層未見黃色或黑色，判供試品未檢出沙門菌。
銅綠假單胞菌(Pseudomonas aeruginosa)
供試液制備和增菌培養(yǎng) 取供試品，照“非無菌產(chǎn)品微生物限度檢查：微生物計數(shù)法”制成1：10 供試液。取相當(dāng)于1g 或1mL 供試品的供試液，接種至適宜體積(經(jīng)方法適用性試驗確定的)的胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基中，混勻。30～35℃培養(yǎng)18～24 小時。
選擇和分離培養(yǎng) 取上述培養(yǎng)物劃線接種于溴化十六烷基三甲銨瓊脂培養(yǎng)基平板上，30～35℃培養(yǎng)18～72 小時。取上述平板上生長的菌落進(jìn)行氧化酶試驗，或采用其它適宜方法進(jìn)一步鑒定。
氧化酶試驗 將潔凈濾紙片置于平皿內(nèi),用無菌玻棒取上述平板上生長的菌落涂于濾紙片上，滴加新配制的1%二鹽酸N, N -二甲基對苯二胺試液，在30 秒內(nèi)若培養(yǎng)物呈粉紅色并逐漸變?yōu)樽霞t色為氧化酶試驗陽性,否則為陰性。
結(jié)果判斷 若溴化十六烷基三甲銨瓊脂培養(yǎng)基平板上有菌落生長，且氧化酶試驗陽性，應(yīng)進(jìn)一步進(jìn)行適宜的鑒定試驗, 確證是否為銅綠假單胞菌。如果平板上沒有菌落生長，或雖有菌落生長但鑒定結(jié)果為陰性，或氧化酶試驗陰性，判供試品未檢出銅綠假單胞菌。
金黃色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)
供試液制備和增菌培養(yǎng) 取供試品，照“非無菌產(chǎn)品微生物限度檢查：微生物計數(shù)法”制成1：10 供試液。取相當(dāng)于1g 或1mL 供試品的供試液，接種至適宜體積(經(jīng)方法適用性試驗確定)的胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基中，混勻。30～35℃培養(yǎng)18～24 小時。
選擇和分離培養(yǎng) 取上述培養(yǎng)物劃線接種于甘露醇氯化鈉瓊脂培養(yǎng)基平板上，30～35℃培養(yǎng)18～72 小時。
結(jié)果判斷 若甘露醇氯化鈉瓊脂培養(yǎng)基平板上有黃色菌落或外周有黃色環(huán)的白色菌落生長，應(yīng)進(jìn)行分離、純化及適宜的鑒定試驗, 確證是否為金黃色葡萄球菌;若平板上沒有與上述形態(tài)特征相符或疑似的菌落生長，或雖有相符或疑似的菌落生長但鑒定結(jié)果為陰性，判供試品未檢出金黃色葡萄球菌。
梭菌(Clostridia)
供試液制備和熱處理 取供試品，照“非無菌產(chǎn)品微生物限度檢查：微生物計數(shù)法”制成1：10 供試液。取相當(dāng)于1g 或1mL 供試品的供試液2 份，其中1 份置80℃保溫10 分鐘后迅速冷卻。
增菌、選擇和分離培養(yǎng) 將上述2 份供試液分別接種至適宜體積(經(jīng)方法適用性試驗確定)的梭菌增菌培養(yǎng)基中，置厭氧條件下30～35℃培養(yǎng)48 小時。取上述每一培養(yǎng)物少量，分別涂抹接種于哥倫比亞瓊脂培養(yǎng)基平板上，置厭氧條件下30～35℃培養(yǎng)48～72 小時。
過氧化氫酶試驗 取上述平板上生長的菌落，置潔凈玻片上，滴加3%過氧化氫試液，若菌落表面有氣泡產(chǎn)生,為過氧化氫酶試驗陽性,否則為陰性。
結(jié)果判斷 若哥倫比亞瓊脂培養(yǎng)基平板上有厭氧桿菌生長(有或無芽孢)，且過氧化氫酶反應(yīng)陰性的，應(yīng)進(jìn)一步進(jìn)行適宜的鑒定試驗, 確證是否為梭菌;如果哥倫比亞瓊脂培養(yǎng)基平板上沒有厭氧桿菌生長，或雖有相符或疑似的菌落生長但鑒定結(jié)果為陰性，或過氧化氫酶反應(yīng)陽性，判供試品未檢出梭菌。
白色念珠菌(Candida albicans)
供試液制備和增菌培養(yǎng) 取供試品，照“非無菌產(chǎn)品微生物限度檢查：微生物計數(shù)法”制成1：10 供試液。取相當(dāng)于1g 或1mL 供試品的供試液，接種至適宜體積(經(jīng)方法適用性試驗確定)的沙氏葡萄糖液體培養(yǎng)基中，混勻，30～35℃培養(yǎng)3～5 天。
選擇和分離 取上述預(yù)培養(yǎng)物劃線接種于沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基平板上，30～35℃培養(yǎng)24～48 小時。
白色念珠菌在沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基上生長的菌落呈乳白色，偶見淡黃色,表面光滑有濃酵母氣味,培養(yǎng)時間稍久則菌落增大，顏色變深、質(zhì)地變硬或有皺褶。挑取疑似菌落接種至念珠菌顯色培養(yǎng)基平板上，培養(yǎng)24～48 小時(必要時延長至72 小時)，或采用其它適宜方法進(jìn)一步鑒定。
結(jié)果判斷 若沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基平板上有疑似菌落生長，且疑似菌在念珠菌顯色培養(yǎng)基平板上生長的菌落呈陽性反應(yīng)，應(yīng)進(jìn)一步進(jìn)行適宜的鑒定試驗,確證是否為白色念珠菌;若沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基平板上沒有菌落生長，或雖有菌落生長但鑒定結(jié)果為陰性，或疑似菌在念珠菌顯色培養(yǎng)基平板上生長的菌落呈陰性反應(yīng)，判供試品未檢出白色念珠菌。
稀釋液
稀釋液配制后,應(yīng)采用驗證合格的滅菌程序滅菌。
1. pH7.0 無菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液 取磷酸二氫鉀3.56g，無水磷酸氫二鈉5.77g，氯化鈉4.30g，蛋白胨1.00g，加水1000ml，微溫溶解，濾清，分裝，滅菌。
2. pH6.8 無菌磷酸鹽緩沖液、pH7.2 無菌磷酸鹽緩沖液 、pH7.6 無菌磷酸鹽緩沖液按緩沖液 照緩沖液配制后,過濾,分裝,滅菌。
如需要,可在上述稀釋液滅菌前或滅菌后加入表面活性劑或中和劑等。
3.0.9%無菌氯化鈉溶液 取氯化鈉9.0g,加水溶解使成1000ml，過濾，分裝，滅菌。
培養(yǎng)基及其制備方法
培養(yǎng)基可按以下處方制備,也可使用按該處方生產(chǎn)的符合要求的脫水培養(yǎng)基。配制后,應(yīng)按驗證過的高壓滅菌程序滅菌。
1.胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基(TSB)
胰酪胨 17.0g 氯化鈉 5.0g
大豆木瓜蛋白酶水解物 3.0g 磷酸氫二鉀 2.5g
葡萄糖/無水葡萄糖2.5g/2.3g 水 1000ml
除葡萄糖外，取上述成分，混合，微溫溶解，濾過，調(diào)節(jié)pH 使滅菌后在25℃的pH 值為7.3±0.2，加入葡萄糖，分裝，滅菌。
2. 胰酪大豆胨瓊脂培養(yǎng)基(TSA)
胰酪胨 15.0g 瓊脂 15.0g
大豆木瓜蛋白酶水解物 5.0g 水 1000ml
氯化鈉 5.0g
除瓊脂外，取上述成分，混合，微溫溶解，調(diào)節(jié)pH 使滅菌后在25℃的pH 值為7.3±0.2，加入瓊脂，加熱熔化后，搖勻，分裝，滅菌。
3. 沙氏葡萄糖液體培養(yǎng)基(SDB)
動物組織胃蛋白酶水解物和胰酪胨等量混合物 10.0g
葡萄糖 20.0g 水 1000ml
除葡萄糖外，取上述成分，混合，微溫溶解，調(diào)節(jié)pH 使滅菌后在25℃的pH 值為5.6±0.2，加入葡萄糖，搖勻，分裝，滅菌。
4.沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基(SDA)
動物組織胃蛋白酶水解物和胰酪胨等量混合物 10.0g
葡萄糖 40.0g 水 1000ml
瓊脂 15.0g
除葡萄糖、瓊脂外，取上述成分，混合，微溫溶解，調(diào)節(jié)pH 使滅菌后在25℃的pH 值為5.6±0.2，加入瓊脂，加熱熔化后，再加入葡萄糖，搖勻，分裝，滅菌。
如使用含抗生素的沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基，應(yīng)確認(rèn)培養(yǎng)基中所加的抗生素量不影響供試品中霉菌和酵母菌的生長。
5.馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基(PDA)
馬鈴薯(去皮) 200g 瓊脂 14.0g
葡萄糖 20.0g 水 1000ml
取馬鈴薯，切成小塊，加水1000mL，煮沸20-30min，用6-8 層紗布過濾，取濾液補(bǔ)水至1000ml，調(diào)節(jié)pH 使滅菌后在25℃的pH 值為5.6±0.2，加入瓊脂,加熱溶化后, 再加入葡萄糖，搖勻，分裝，滅菌。
6.玫瑰紅鈉瓊脂培養(yǎng)基
胨 5.0g 玫瑰紅鈉 0.0133g
葡萄糖 10.0g 瓊脂 14.0g
磷酸二氫鉀 1.0g 水 1000ml
硫酸鎂 0.5g
除葡萄糖、玫瑰紅鈉外,取上述成分,混合,微溫溶解，加入葡萄糖、玫瑰紅鈉,搖勻，分裝，滅菌。
7.硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基
胰酪胨 15.0g 氯化鈉 2.5g
酵母浸出粉 5.0g 瓊脂 0.75g
無水葡萄糖 5.0g 水 1000 ml
L-胱氨酸 0.5g
新配制的0.1%刃天青溶液 1.0 ml
硫乙醇酸鈉(或硫乙醇酸) 0.5g(0.3 ml)
除葡萄糖和刃天青溶液外,取上述成分,混合,微溫溶解，調(diào)節(jié)pH為弱堿性，煮沸，濾清，加入葡萄糖和刃天青溶液,搖勻，調(diào)節(jié)pH，使滅菌后在25℃的pH 值為7.1±0.2。分裝至適宜的容器中，其裝量與容器高度的比例應(yīng)符合培養(yǎng)結(jié)束后培養(yǎng)基氧化層(粉紅色)不超過培養(yǎng)基深度的1/2。滅菌。在供試品接種前，培養(yǎng)基氧化層的高度不得超過培養(yǎng)基深度的1/5，否則，須經(jīng)100℃水浴加熱至粉紅色消失(不超過20分鐘)，迅速冷卻，只限加熱一次，并防止被污染。
8.腸道菌增菌液體培養(yǎng)基
明膠胰酶水解物 10.0g 二水合磷酸氫二鈉 8.0g
牛膽鹽 20.0g 亮綠 15mg
葡萄糖 5.0g 水 1000ml
磷酸二氫鉀 2.0g
除葡萄糖、亮綠外,取上述成分,混合,微溫溶解，調(diào)節(jié)pH 使加熱后在25℃的pH 值為7.2±0.2，加入葡萄糖、亮綠，加熱至100℃ 30 分鐘，立即冷卻。
9.紫紅膽鹽葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基
酵母浸出粉 3.0g 中性紅 30mg
明膠胰酶水解物 7.0g 結(jié)晶紫 2mg
脫氧膽酸鈉 1.5g 瓊脂 15.0g
葡萄糖 10.0g 水 1000ml
氯化鈉 5.0g
除葡萄糖、中性紅、結(jié)晶紫、瓊脂外,取上述成分,混合,微溫溶解，調(diào)節(jié)pH使加熱后在25℃的pH 值為7.4±0.2。加入葡萄糖、中性紅、結(jié)晶紫、瓊脂，加熱煮沸(不能在高壓滅菌器中加熱)。
10.麥康凱液體培養(yǎng)基
明膠胰酶水解物 20.0g 溴甲酚紫 10mg
乳糖 10.0g 水 1000ml
牛膽鹽 5.0g
除乳糖、溴甲酚紫外，取上述成分，混合，微溫溶解，調(diào)節(jié)pH 使滅菌后在25℃的pH 值為7.3±0.2，加入乳糖、溴甲酚紫，分裝，滅菌。
11.麥康凱瓊脂培養(yǎng)基
明膠胰酶水解物 17.0g 中性紅 30.0mg
胨 3.0g 結(jié)晶紫 1mg
乳糖 10.0g 瓊脂 13.5g
脫氧膽酸鈉 1.5g 水 1000ml
氯化鈉 5.0g
除乳糖、中性紅、結(jié)晶紫、瓊脂外，取上述成分，混合，微溫溶解，調(diào)節(jié)pH使滅菌后在25℃的pH 值為7.1±0.2，加入乳糖、中性紅、結(jié)晶紫、瓊脂，加熱煮沸1 分鐘，并不斷振搖，分裝，滅菌。
12.RV 沙門菌增菌液體培養(yǎng)基
大豆胨 4.5g 六水合氯化鎂 29.0g
氯化鈉 8.0g 孔雀綠 36mg
磷酸氫二鉀 0.4g 水 1000ml
磷酸二氫鉀 0.6g
除孔雀綠外，取上述成分，混合，微溫溶解，調(diào)節(jié)pH 使滅菌后在25℃的pH值為5.2±0.2。加入孔雀綠，分裝，滅菌,滅菌溫度不能超過115℃。
13.木糖賴氨酸脫氧膽酸鹽瓊脂培養(yǎng)基
酵母浸出粉 3.0g 氯化鈉 5.0g
L-賴氨酸 5.0g 硫代硫酸鈉 6.8g
木糖 3.5g 枸櫞酸鐵銨 0.8g
乳糖 7.5g 酚紅 80mg
蔗糖 7.5g 瓊脂 13.5g
脫氧膽酸鈉 2.5g 水 1000ml
除三種糖、酚紅、瓊脂外，取上述成分，混合，微溫溶解,調(diào)節(jié)pH 使加熱后在25℃的pH 值為7.4±0.2，加入三種糖、酚紅、瓊脂，加熱至沸騰，冷至50℃傾注平皿(不能在高壓滅菌器中加熱)。
14.三糖鐵瓊脂培養(yǎng)基(TSI)
胨 20.0g 硫酸亞鐵 0.2g
牛肉浸出粉 5.0g 硫代硫酸鈉 0.2g
乳糖 10.0g 0.2%酚磺酞指示液 12.5ml
蔗糖 10.0g 瓊脂 12.0g
葡萄糖 1.0g 水 1000ml
氯化鈉 5.0g
除三種糖、0.2%酚磺酞指示液、瓊脂外，取上述成分，混合，微溫溶解, 調(diào)節(jié)pH 使滅菌后在25℃的pH 值為7.3±0.1，加入瓊脂，加熱溶化后，再加入其余各成分，搖勻，分裝，滅菌，制成高底層(2～3cm)短斜面。
15.溴化十六烷基三甲銨瓊脂培養(yǎng)基
明膠胰酶水解物 20.0g 甘油 10ml
氯化鎂 1.4g 溴化十六烷基三甲銨 0.3g
硫酸鉀 10.0g 瓊脂 13.6g
水 1000ml
除瓊脂外，取上述成分，混合，微溫溶解，調(diào)節(jié)pH 使滅菌后在25℃的pH 值為7.4±0.2，加入瓊脂，加熱煮沸1 分鐘，分裝，滅菌。
16.甘露醇氯化鈉瓊脂培養(yǎng)基
胰酪胨 5.0g 氯化鈉 75.0g
動物組織胃蛋白酶水解物 5.0g 酚紅 25mg
牛肉浸出粉 1.0g 瓊脂 15.0g
D-甘露醇 10.0g 水 1000ml
除甘露醇、酚紅、瓊脂外，取上述成分，混合，微溫溶解，調(diào)節(jié)pH 使滅菌后在25℃的pH 值為7.4±0.2，加熱并振搖，加入甘露醇、酚紅、瓊脂，煮沸1分鐘，分裝，滅菌。
17.梭菌增菌培養(yǎng)基
胨 10.0g 鹽酸半胱氨酸 0.5g
牛肉浸出粉 10.0g 乙酸鈉 3.0g
酵母浸出粉 3.0g 氯化鈉 5.0g
可溶性淀粉 1.0g 瓊脂 0.5g
葡萄糖 5.0g 水 1000ml
除葡萄糖外，取上述成分，混合，加熱煮沸使溶解，并不斷攪拌。如需要，調(diào)節(jié)pH 使滅菌后在25℃的pH 值為6.8±0.2。加入葡萄糖，混勻，分裝，滅菌。
18.哥倫比亞瓊脂培養(yǎng)基
胰酪胨 10.0g 玉米淀粉 1.0g
肉胃蛋白酶水解物 5.0g 氯化鈉 5.0g
心胰酶水解物 3.0g 瓊脂 10.0～15.0g(依凝固力)
酵母浸出粉 5.0g 水 1000ml
除瓊脂外，取上述成分，混合，加熱煮沸使溶解，并不斷攪拌。如需要，調(diào)節(jié)pH 使滅菌后在25℃的pH 值為7.3±0.2，加入瓊脂，加熱溶化，分裝，滅菌。如有必要，滅菌后，冷至45～50℃加入相當(dāng)于20mg 慶大霉素的無菌硫酸慶大霉素，混勻，傾注平皿。
19.珠菌顯色培養(yǎng)基
胨 10.2g 瓊脂 15g
氫罌素 0.5g 水 1000ml
色素 22.0g
除瓊脂外,取上述成分,混合,微溫溶解,調(diào)節(jié)pH 值使加熱后在25℃的pH 為6.3±0.2。濾過，加入瓊脂，加熱煮沸，不斷攪拌至瓊脂完全溶解，傾注平皿。
以上是由小編分享的2016版藥典微生物檢驗的學(xué)習(xí)與實施全部內(nèi)容，希望對你的考試有幫助。